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色譜分析中幾個(gè)時(shí)間概念
日常色譜分析中,參考的標(biāo)準(zhǔn)方法、使用的色譜軟件上會(huì)涉及一些時(shí)間概念,比如保留時(shí)間、調(diào)整保留時(shí)間、死時(shí)間、相對(duì)保留時(shí)間、延遲時(shí)間等,這些概念看著都是時(shí)間,差別卻很大,還有的和時(shí)間沒關(guān)系。
一. 保留時(shí)間
保留時(shí)間(Retention Time)。指從進(jìn)樣開始到出現(xiàn)某組分色譜峰的頂點(diǎn)時(shí)為止所經(jīng)歷的時(shí)間,稱為此組分的保留時(shí)間,用RT、tR表示,常以分(min)為單位。如下圖一中,組分的保留時(shí)間是10.0min。

在色譜分析中,保留時(shí)間主要用于定性分析以識(shí)別目標(biāo)組分。保留時(shí)間通常有一定的變化區(qū)間,比如流動(dòng)相緩沖鹽濃度、緩沖鹽種類、流動(dòng)相pH、流動(dòng)相比例、柱溫、基質(zhì)效應(yīng)等因素的微小變化,特別是對(duì)檢測(cè)條件敏感的項(xiàng)目,或者分析復(fù)雜的樣品,可能保留時(shí)間的微小變化也會(huì)影響相鄰組分的分離。
在制備純化中,保留時(shí)間的概念使用較少,因?yàn)橹苽渖V的上樣量大,一般是過載的,組分的峰型通常是拖尾峰或圓頭峰,其色譜行為偏離線性范圍,再加上相鄰組分的擠出效應(yīng),保留時(shí)間對(duì)制備色譜,基本沒有指導(dǎo)意義。
二. 死亡時(shí)間
死時(shí)間(Dead Time)。是指流動(dòng)相(或溶劑)通過色譜柱的時(shí)間,即不被色譜柱固定相保留的組分的保留時(shí)間,用t0表示,如圖二中,死時(shí)間是1.4min。
三. 調(diào)整保留時(shí)間
調(diào)整保留時(shí)間(Adjusted Retention Time)。某組分由于溶解(或者吸附)于固定相,比不溶解(或者不吸附)的組分在柱中多停留的時(shí)間稱為調(diào)整保留時(shí)間,用t’R表示。計(jì)算公式是:調(diào)整保留時(shí)間=保留時(shí)間-死時(shí)間,如圖二中,組分的調(diào)整保留時(shí)間是8.6min。

四. 相對(duì)保留時(shí)間
相對(duì)保留時(shí)間(Relative Retention Time,簡(jiǎn)稱RRT)。它并不是一個(gè)時(shí)間單位。色譜分析中,樣品組分保留時(shí)間的變化受很多因素影響,但是大多組分在一定范圍內(nèi)受到的影響,其變化趨勢(shì)相同。為避免正常測(cè)試時(shí),待測(cè)組分的峰被認(rèn)錯(cuò),通常會(huì)選擇最不易被認(rèn)錯(cuò)的峰(一般是已知結(jié)構(gòu)和純度的組分,或者含量較大的組分)作為參照,并計(jì)算其他峰的保留時(shí)間和參照峰的保留時(shí)間之比,其結(jié)果一般不受保留時(shí)間變化的影響。
五. 延遲時(shí)間
延遲時(shí)間(Delay Time),是指從溶劑混合點(diǎn)(通常在液相色譜儀的混合腔內(nèi)或比例閥中)到達(dá)色譜柱入口端的時(shí)間,主要取決于混合器和色譜柱間的溶劑混合器和連接管的死體積,也叫延遲體積,或者梯度延遲體積。

延遲體積對(duì)于液相色譜分析的準(zhǔn)確性和重復(fù)性的影響很大,特別是梯度洗脫條件。所采用的儀器配置,直接影響梯度洗脫時(shí)延遲體積的大小,從而影響方法的分離度、保留時(shí)間等。延遲體積越大,改變梯度比例后流動(dòng)相到達(dá)色譜柱入口端的時(shí)間就越長(zhǎng),尤其是在低流速下,組分出峰時(shí)間越慢,同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致色譜峰展寬,降低靈敏度和柱效。由于不同儀器的延遲體積不同,這種差異可能會(huì)影響梯度方法的重現(xiàn),可能會(huì)對(duì)分離度及保留時(shí)間造成影響,進(jìn)一步會(huì)影響方法轉(zhuǎn)移或驗(yàn)證。
